1、热水浸提法
称取20g白桦茸粉末,加入15-30倍量的水,在一定温度下提取2-6h,抽滤、提取液适当浓缩,加入约4倍浓缩液体积的95%乙醇,0℃静置过夜,过滤、沉淀物放入电热鼓风干燥箱于60℃干燥,得到白桦茸粗多糖,多糖粗提物加热蒸馏水复溶,加1/4体积Sevag溶液(将氯仿和正丁醇溶液按4:1比例混合)脱蛋白,糖液加入约4倍浓缩液体积的95%乙醇,0℃静置过夜,抽滤,反复用丙酮洗涤,沉淀物放入电热鼓风干燥箱于60℃干燥备用。
为了确定白桦茸多糖水浸提法的最佳工艺条件,可以选择浸提温度(40℃、80℃、100℃)、浸提时间(2h、4h、6h)、料液比(1:20、1:25、1:30)和物料粒度(20-40目、40-60目、小于60目)为考察因素,以多糖得率和纯度为考察指标,采用单因素实验,做L9(34)正交试验方法对提取工艺进行优化。
最终确定了多糖的最优方案为:提取温度100℃,提取时间4h,料液比1:30,物 料粒度40-60目,得多糖得率和纯度分别为1.841%、34.32%。
2、碱液提取法
称取10g沸水浴提取后的固形物残渣,加入15-30倍量的水,在一定温度下提取2-6h,离心、收集上清液,用1mol/L盐酸中和提取液,适当浓缩,加入约4倍浓缩液体积的95%乙醇,0℃静置过夜,过滤、沉淀物放入电热鼓风干燥箱于60℃干燥,得到碱提白桦茸粗多糖,多糖粗提物加热蒸馏水复溶,加1/4体积Sevag溶液(将氯仿和正丁醇溶液按4:1比例混合)脱蛋白,糖液加入约4倍浓缩液体积的95%乙醇,0℃静置过夜,抽滤,反复用丙酮洗涤,沉淀物放入电热鼓风干燥箱于60℃干燥备用。中和所得沉淀物经蒸馏水洗涤后,冷冻干燥得到褐色固形物即为碱提不溶粗多糖。
同样的,为提高得率,可以在各种提取参数均采用水提多糖参数的前提下,选择浸提碱液浓度(0.1moL/L、0.25moL/L、0.5moL/L、0.75moL/L、1moL/L)为考察因素,以多糖得率和纯度为考察指标,对提取工艺进行优化。
确定了最终的最优方案为:提取时碱液的浓度采取0.75moL/L,碱提可溶多糖为3.6%,纯度为36.5%,碱提不溶粗多糖的得率为5.2%。为提高白桦茸多糖的提取效率,众多研究者为此也做出了不懈努力。许泓瑜等利用响应面法优化得到了白桦茸多糖的最佳提取工艺为:温度83℃,提取时间为2.2h,料液比为33.3:1,白桦茸多糖的提取率达到24.578%。
3、超声-微波辅助提取法
白桦茸经粉碎后,过40目筛,用体积分数为80%的乙醇溶液在70℃条件下回流2次,每次3h,以有效去除部分醇溶性物质,然后1000r/min离心20min,去上清液,沉淀经60℃真空干燥,得到预处理白桦茸粉。将预处理的白桦茸粉样品置于与50W超声波换能器紧密粘结的250ml玻璃萃取容器中,以水为溶剂,将换能器卡入微波腔中央底部,其产生直接超声振动,与此同时,磁控管发射天线上的微波通过波导管作用于样品及溶剂。萃取容器通过转换接头与一球形冷凝管相连,受热溶剂蒸汽经冷凝管冷却并回流至样品容器。设定一定的萃取时间和微波辐射功率,开启仪器,当萃取完成后,再放置冷却片刻取出,然后将提取液在1000r/min转速下离心10min,合并上清液,之后将上清液进行减压浓缩,并用工业酒精调至含醇量为 80%,静置过夜后离心,沉淀用无水乙醇洗涤3次,然后冷冻干燥即得粗多糖。
为了确定超声-微波辅助提取白桦茸多糖的最佳工艺条件,利用响应面分析法优化超声-微波提取白桦茸多糖参数。在单因素预试验的基础上,选择提取时间(15min、20min、25min)、料液比(1:15、1:20、1:25)、微波功率(55W、85W、115W)作为因素,利用SAS软件系统进行响应面分析, 设计了1个3因素3水平的二次回归方程来拟合因素和指标(响应值)之间的函数关系。
固定料液比1:20不变时,得出的最佳的工艺条件为:提取时间18.45~24.50min,微波功率88.3~96.7W。
综上所述,白桦茸多糖一般采用传统的热水浸提或者加以一定的物理方法予以辅助,但是水浸提存在提取时间长和温度高的缺点。为了进一步提高白桦茸多糖得率和纯度,应该更多采用微波、超声等物理方法辅助提取技术。
4、超临界低温萃取法
由北京西伯利亚白桦茸研发有限公司与俄罗斯西伯利亚天然野生植物有限公司共同开发的100%水溶性西伯利亚白桦茸提取物产品,率先将超临界低温萃取方法运用于白桦茸多糖、桦褐孔菌醇等有用物质的提取、纯化,整个生产过程中在低温环境下进行,最大化保留白桦茸子实中的有用物质,以及多糖和其他有用物质的生物活性。
低温萃取是由结合剪力与振动力效应之低温萃取技术、复合式微波萃取技术和超临界二氧化碳萃取分离技术三项技术所整合而成。“低温萃取技术”可根据原物料之特性与产品需求进行组合调整,具有高效率、环保、安全与确保有效成分活性等优点,适用范围相当广泛,操作温度低于 60℃,可确保天然物中有效成分的活性,不使用有害人体之溶剂,以经济的方式进行萃取分离,可充分保留其有效成分与香气该技术具有其重要性与前瞻性。
“超临界低温萃取”利用超临界流体的溶剂强度取决于萃取的温度和压力,只需要改变萃取剂流体的压力和温度,就可以把样品中的不同组分按在流体中溶解度的大小,先后萃取出来,在低压下弱极性的物质先萃取,随着压力的增加,极性较大和大分子量的物质与基本性质,所以在程序升压下进行超临界萃取不同萃取组分,同时还可以起到分离的作用。
超临界低温萃取与超微破壁粉碎、低温真空干燥工艺并被称为当前白桦茸提取的三大现代化工艺,由此生产的白桦茸产品具有纯度高、有效性好、易吸收等特点,真正实现珍稀资源白桦茸的高效利用,更好服务于人们的健康生活。
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